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乙肝ELISA检测中抗原和抗体共存模式分析

发表时间:2020-12-04 11:00
摘 要目的 分析抗原和抗体双阳性的原因。方法  初筛试验用一步检测。结果 近三年酶免疫分析技术共检测乙肝病毒表面抗原阳性标本2278份,HBeAg、抗HBe阳性为565份,其中21例乙肝病毒表面抗原及其表面抗体(  HBsAg、抗HBs )双阳性占0.92%,假阳性9份占0.39%,15例乙肝病毒e抗原及其e抗体(HBeAg、抗HBe  )双阳占2.65%,假阳性11份占1.95%,两项全阳性4份占0.08%。结论“只要抗原与抗体双阳”应进行复核。
关键词   乙型肝炎病毒   酶免技术   复核
ELISA detection of hepatitis B antigen and antibody coexistence mode analysis
PEIBING XUYUAN LIU JIA-xi WUHUI
AbstractObjective Analysis of antigen and antibody double positive reasons. Methods Screening Test step Detection Results Nearly three years enzyme immunoassay analysis techniques were detected hepatitis B virus surface antigen positive samples in 2278, HBeAg, anti-HBe positive for the 565, of which 21 cases of hepatitis B virus surface antigen and antibody surface (HBsAg and anti-HBs) double positive of 0.92% , the false positive of 0.39% in September, 15 cases of hepatitis B virus e antigen and antibody e (HBeAg, anti-HBe) Shuangyang accounted for 2.65%, the false positive 1.95% for 11, two of the four full-positive 0.08%。Conclusion"As long as antigen and antibody Shuangyang" review should be carried out.
KeywordsHepatitis B Virus;ELISA technology;Review
血清乙型肝炎病毒HBeAg和抗HBe双阳,都为急性期,表明病毒复制活跃、传染性强。HBsAg和抗HBs双阳为亚临床表现。近年来,普遍使用ELISA一步法,在工作中遇到双阳的少见模式,为了分析这一现象,笔者进行了临床统计与分析,现报告如下。
1材料与方法
1.1   标本来源  本院门诊和肝病区患者血清2278份。每发现双阳标本就冰冷保存,现把保存冷冻保存的双阳标本38份,进行再次检测及用计算机数据统计和分析。
1.2   试剂和仪器 (1)ELISA试剂盒,上海荣盛生,酶标仪MODEL550  FLEXI ASYS洗板机。HBsAg、抗HBs 、HBeAg 、抗HBe样品吸光度值(S/N)≥2.1。(2)相应抗体吸光都在S/N≤3.0。
1.3   方法 (1)初筛:一步法,严格按说明书操作,对已保留的双抗标本进行再次检测。(2)复核:把容血的标本,脂血标本,再计算机中及传染科医师找到病人病历资料通知进行了重抽血。(3)对常见的干扰物质:类风湿阳性检测时用2-基乙醇等加入标本稀释中,使RF降解。对补体用60℃,10min或56℃,30min加热血清使C1q灭活。
1.4   根据操作按试剂说明书    结果判断标准:(1)HBsAg 、抗-HBs、 HBeAgCutff值计算:COV=阴性照平均值OD×2.1 标本OD值≥COV为阳性,标本OD值<COV值为阴性。  (2)抗-HBe   Cutff值计算COV=阴性对照平均OD值×0.5
 标本OD值≥COV为阴性,标本OD值<COV值为阳性。
2 结果   初筛38份双抗阳性血清,经复核 1份HBsAg阴性,8份抗-HBs阴性,4份HBeAg阴性,7份抗-HBe阴性,初筛与复核吸光度(A值)比较,差异非常显著 P>0.5  见表1.  其中24份双抗阳性复核标本比较。
 
表1双抗阳性复核S/OD值比较     
前S/CO值 复S/CO值 前S/CO值 复S/CO值
HBsAg 抗-HBs HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe HBeAg 抗-HBe
15.91 1.44 16.31 0.89 6.94 0.928 1.98 2.16
2.46 11.87 0.98 13.25 12.43 0.112 11.55 0.09
15.63 4.59 15.05 1.02 11.64 0.087 12.87 1.32
15.50 1.61 14.61 0.78 3.53 0.857 4.71 1.19
4.45 11.92 7.74 12.92 1.217 0.994 1.104 0.62
12.28 2.05 12.77 0.67 1.26 0.658 1.31 1.13
12.55 8.09 11.56 0.97 11.59 0.938 10.08 1.058
6.38 12.64 3.81 12.32 5.19 0.163 0.97 0.168
11.38 3.33 11.81 0.88 7.82 0.498 2.21 0.098
6.23 12.38 4.88 12.20 1.12 0.865 1.321 0.654
12.57 3.11 13.15 0.95 17.24 0.425 1.62 1.18
11.81 4.09 12.85 0.96 10.06 0.095 13.23 1.87
8.76 2.62 8.09 4.70 8.05 0.339 0.58 0.09
12.66 3.72 11.87 0.98 11.71 0.49 7.89 1.04
3 讨论
有学者提出HBsAg,抗-HBs双阳多为同时或相继不同的HBV亚型感染,也有报到同时阳性者发生于接种乙型肝炎疫苗后,发生了变异株感染,出现了HBsAg肽G145R的逃逸变异。HBeAg,抗-HBe双阳多数是HBeAg向抗HBe转化的过度阶段。本次试验发现双阳性的结果中一项假阳性的占43% 和73%,可能的原因为:(1) 溶血标本释放大量过氧化物酶活性的血红蛋白,产生干扰。(2)脂血致抗体干扰主要考虑乳縻微粒引起,造成血清粘度增大的运动速度减慢或产生屏蔽效应,产生假阳性。(3)可能是冰冻的标本,或者还有AFP,RF,补体,自身抗体,抗大肠杆菌抗体等的干扰。(4)假阳性的Cutff值都是在判定Cutff值左右。
综上所述,双抗阳性的标本的假阳性有可能为干扰物质所致或操做不规范等因素造成,在工作中笔者建议发现双阳的标本一定要进行复核,并尽可能的排除干扰因素,复核可有效消除假阳性的产生。
参考文献
1. 李梦东,实用传染病学,第二版,北京:人民卫生出版社,1998,104。
2. 黄云英,建立乙肝免疫五项无效试剂,临床二级评价方案的探讨,现代医学检验杂志,2002。
3. 佳良,对病毒性肝炎患者血清HBsAg复合物及抗-HBs独特型抗体的联合检测,中华微生物学和免疫学杂志,1993,180。
    4.赵友云,酶免疫检测HBeAg假阳性原因分析,临床检验杂志,2000。

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